论文摘要
大叶藻（Zostera marina L.）是多年生海草，属被子植物门，单子叶植物纲，沼生目，隶属于眼子菜科（Potamogetonaceae）大叶藻属（Zostera）。大叶藻是海草床的重要组成部分，但迄今为止，在大叶藻的利用方面是很不充分的，仅利用其搭建海草房，这不仅未发挥其在营养学方面的价值，而且还浪费了大量的海草资源。黄酮类化合物是一类广泛存在的天然抗氧化剂，研究表明其具有多种生理功能，如降血脂、抗氧化、抗癌等功能。但是对于黄酮化合物的研究一般只限于陆生高等植物，海洋中的高等植物并未被充分开发利用。本文主要对海洋高等植物——大叶藻，研究其总黄酮的提取、纯化及结构鉴定，并研究总黄酮的抗衰老活性，主要研究结果如下：首先进行了大叶藻总黄酮的提取工艺实验，利用单因素和正交实验确定了热水提取工艺和微波辅助提取工艺的最佳条件，并对两种工艺的最大得率与前人报道的结果进行比较。热水提取工艺的最佳条件：水浴温度80℃，料液比1:60(g:mL)，提取次数为5，提取时间1h，大叶藻中总黄酮的得率为4.02%；微波辅助提取工艺的最佳条件：微波功率640W，提取料液比为1:40(g:mL)，提取次数为5，提取时间150s，大叶藻中总黄酮的得率为3.66%。与前人报道的工艺相比较，本研究的两种工艺优于传统工艺，与超声辅助浸提工艺相近，但低于酶法辅助浸提工艺。其次，选择5种大孔吸附树脂，通过静态吸附和解吸实验，选定两种最优树脂D101-1和AB-8；再将两种树脂混合进行试验，选出混合吸附树脂最优的混合比例，最后通过静态实验与动态实验确定了最佳纯化工艺条件：D101-1和AB-8吸附树脂按质量比2:3比例混合，样液pH为3，样液质量浓度为1.25mg/mL，洗脱液乙醇浓度为70%，上样体积和上样流速分别为6BV和3BV/h，洗脱体积和洗脱流速分别为5BV和3BV/h，而且树脂的重复使用性能比较好。在最佳纯化条件下，冻干样品的总黄酮纯度由原来12.66%±0.42%上升至51.25%±1.26%，提高了接近4倍。经LC-MS初步判断纯化后的大叶藻总黄酮主要含有木犀草素和香叶木素，并且在大叶藻中首次发现香叶木素。最后，对大叶藻总黄酮的抗衰老活性进行了研究，颈背部皮下注射D-半乳糖致小鼠衰老，同时灌胃不同剂量的大叶藻总黄酮，观察大叶藻总黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠的影响。结果表明：第一，大叶藻总黄酮能够增加D-半乳糖致衰老小鼠的体重，并且能够增加衰老小鼠的脑和胸腺指数；第二，大叶藻总黄酮能够提高D-半乳糖致衰老小鼠的血清、肝脏、脑组织中T-SOD的活力水平，并能够抑制MDA含量的升高，还可以提高血清和肝脏中的T-AOC以及提高肝脏和脑组织中GSH-PX和CAT的活力水平，从而提高机体的抗氧化能力；第三，大叶藻总黄酮能够显著增加D-半乳糖致衰老小鼠肝、脑细胞膜的Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力水平，提高细胞膜离子的转运能力；第四，大叶藻总黄酮能够显著提高D-半乳糖致衰老小鼠血清和脑中ChAT的活性，抑制脑中AChE活性，维持乙酰胆碱的水平稳定。