论文摘要
西瓜（Citrullus lanatus.）属葫芦科，是我国重要的园艺作物。目前，我国西瓜主要栽培品种大部分抗病性不强，在生产过程中常会受到各种病害的威胁，尤以枯萎病最为严重，显著影响了西瓜的产量和品质。从银杏种仁中提取出来的抗菌肽蛋白Gnk2-1已被证实对瓜类尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）有较强的抑制作用。本研究利用花粉管通道法介导抗菌肽基因Gnk2-1转入西瓜品种04-1-2和H45中，研究外源DNA的导入对受体植株果实及种子发育的影响，并对子代植株进行分子检测及抗病鉴定，探讨了花粉管通道法对西瓜进行转基因研究的可行性。主要研究结果如下：1.利用花粉管通道法将浓度为100ng/μL、200ng/μL、300ng/μL、400ng/μL的银杏抗菌肽基因Gnk2-1DNA溶液分别于授粉后24h、27h、30h、33h导入西瓜品种04-1-2和H45子房中，04-1-2T0代坐果率随授粉后处理时间的增加而升高，平均坐果率为33.8%，较对照降低了56.2%；H45T0代平均坐果率为6.2%，较对照降低了73.8%。04-1-2和H45的平均单瓜结籽数均随授粉后处理时间的增加而升高，但在各个处理时间下均显著低于对照。2.银杏抗菌肽基因Gnk2-1的导入对授粉后27h处理的04-1-2T1代种子发芽率和授粉后24h处理的04-1-2T1代种子出苗率均造成显著降低，其他处理差异不显著；不同DNA浓度转化的04-1-2T1代种子的发芽率和出苗率与对照相比差异不显著。各时间处理的H45T1代种子的发芽率和出苗率均显著低于对照；发芽率仅在DNA浓度为200ng/μL时明显降低，出苗率在各浓度下均显著低于对照。3.对04-1-2和H45的T1代幼苗进行卡那霉素抗性筛选表明其卡那霉素抗性筛选率分别为7.9%和1.3%。对04-1-2T1代卡那霉素抗性植株进行PCR检测共检测出32株PCR阳性植株，总体转化率为2.5%，最佳转化时间为授粉后24-27h，最佳DNA转化浓度为100-200ng/μL；H45T1代卡那霉素抗性植株中没有检测出PCR阳性植株。4.对04-1-2PCR阳性植株进行抗菌鉴定，浸根法接种西瓜枯萎病2号生理小种,10天后观察到转基因植株对枯萎病的抗性有所增强，较之非转基因植株发病范围小，发病迟缓。