论文摘要
研究背景调控细胞周期阻滞和细胞凋亡的锌指蛋白(zinc finger protein which regulates apoptosis and cell cycle arrest, ZAC)为一种转录因子,具有转录活化活性和DNA结合功能,可诱导细胞凋亡和细胞G1期阻滞。P300是细胞内具有广泛功能的转录激活因子,其组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase, HAT)结构域是P300乙酰化底物蛋白和转录激活的核心结构域。ZAC作为1个转录辅因子与HAT和/或组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)协作调控基因表达。前期的研究表明,生长抑素(somatostatin, SST)类似物奥曲肽(otreotide, OCT)可以时间和浓度依赖方式诱导胃癌细胞ZAC基因的表达,ZAC在OCT抑制胃癌细胞增殖通路具有关键作用；HDAC抑制剂曲古抑菌素A (trichostatin A, TSA)可上调胃癌细胞ZAC基因表达。目的观察OCT对胃癌细胞SGC7901P300-HAT活性的效应,并探讨其作用机制。材料与方法1.实验分组将胃癌细胞SGC7901随机分为4组：实验组1-3加入终浓度为10nmol/L的OCT培养液,分别作用12h、24h和48h；对照组,加入无OCT培养液。收集4组细胞,分别提取核蛋白。2.OCT对胃癌细胞SGC7901P300-HAT活性的效应应用活性光度法检测4组细胞核蛋白P300-HAT的活性,观察OCT对胃癌细胞SGC7901P300-HAT活性的效应。3.OCT对胃癌细胞SGC7901P300基因表达的效应应用Western blot检测4组细胞P300蛋白的量,观察OCT对胃癌细胞SGC7901P300基因表达的效应。4.胃癌细胞SGC7901ZAC与P300的相互作用应用蛋白质免疫共沉淀方法提取4组细胞ZAC-P300复合物,应用Western blot检测4组细胞ZAC-P300复合物的量,观察胃癌细胞SGC7901ZAC与P300的相互作用。5.统计学处理所有数据以均数±标准差(x±s)表示,应用SPSS20.0统计软件处理数据,P<0.05为差异有显著性。结果：1.OCT对胃癌细胞SGC7901P300-HAT活性的效应对照组、12h、24h和48h组胃癌细胞SGC7901P300-HAT活性分别为：0.00068627433±0.000254713082、0.00163398700±0.000123363301、0.00269607833±0.000084904553和0.00388888867±0.000141507396,实验组与对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。10nmol/L OCT以时间依赖的方式升高胃癌细胞SGC7901P300-HAT活性。2.OCT对胃癌细胞SGC7901P300基因表达的效应对照组、12h、24h和48h组胃癌细胞SGC7901P300/β-Tubulin值分别为：0.211±0.002、0.210±0.007、0.208±0.014和0.216±0.004。3个实验组与对照组P300基因表达无显著性差异(P.>0.05)。3.胃癌细胞SGC7901ZAC与P300的相互作用胃癌细胞SGC7901ZAC与P300蛋白可相互作用。对照组、12h、24h和48h组胃癌细胞SGC7901ZAC-P300复合物的相对量分别为：5812.568±933.548、5869.995±1067.049、5810.128±975.091和3563.223±382.192。12h和24h组ZAC-P300复合物的相对量与对照组无显著性差异(P>0.05),而48h组明显下降(P<0.05)。结论：通过ZAC与P300的相互作用,OCT可升高胃癌细胞SGC7901P300-HAT的活性。