尿酸酶制剂在鸡体内的应用研究

论文编号:SP012论文字数:32453,页数:58

目录

第一部分 前言2

1尿酸酶的研究简史[3，4]3

2核酸疫苗4

2.1质粒载体的生物学特征5

2.2 pET28a和pcDNA3.1-Uc的结构特征5

3酶类制剂7

3.1酶纯化方法[10]8

3.2酶含量的测定9

3.3尿酸酶活性的测定方法[12]9

3.3.1终止反应法（Stopped Method）9

3.3.2连续反应法（Continuous Method）10

4高尿酸血症动物模型的研究[14]10

4.1建立高尿酸酶血症动物模型的基本原理11

4.2动物的选择12

4.3 鸡痛风病模型的研制13

5 实验目的和意义15

第二部分 尿酸酶的核酸（pcDNA3.1-UC质粒）制剂在鸡体内的表达研究15

1材料与方法15

1.1 材料15

1.1.1 菌种和质粒15

1.1.2试剂和溶液配置15

1.1.3 仪器19

1.2实验方法20

1.2.1菌体的活化20

1.2.2质粒pcDNA3.1-UC大量制备20

1.2.3质粒pcDNA3.1-UC的琼脂糖凝胶电泳21

1.2.4经RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC质粒的琼脂糖凝胶电泳21

1.2.5离子交换层析纯化pcDNA3.1-UC质粒21

1.2.6 PCR鉴定纯化质粒为pcDNA3.1-UC23

1.2.7 pcDNA3.1-UC质粒在鸡体内的表达的检测24

2结果与分析27

2.1 电泳检测提取的pcDNA3.1-UC质粒27

2.2经RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC质粒的琼脂糖凝胶电泳检测27

2.3 DEAE离子交换层析曲线28

2.4 纯化质粒为pcDNA3.1-UC PCR鉴定29

2.5 pcDNA3.1-UC质粒在鸡体内的表达分析29

2.5.1质粒DNA溶液浓度的测定实验结果29

2.5.2 鸡血清尿酸含量测定试验结果:30

3讨论34

第三部分 尿酸酶制剂在鸡体内的应用研究34

1材料与方法34

1.1材料34

1.1.1菌种34

1.1.2 试剂及其配置34

1.1.3 仪器37

1.2 实验方法38

1.2.1 酶活性的检测38

1.2.2菌体的培养及诱导表达39

1.2.3表达产物的提取39

1.2.4硫酸铵分段盐析40

1.2.5 酶蛋白浓缩40

1.2.6分子筛层析分离BL21/ pET28a-UC表达产物40

1.2.7 鸡血清尿酸含量测定43

1.2.8 ELISA实验检测鸡尿酸酶抗体44

2 结果与分析46

2.1分子筛（sephadex-200）纯化BL21/ pET28a-UC表达产物的结果46

2.2尿酸酶溶液中酶活性测定的实验结果46

2.3 酶蛋白的DEAE离子交换曲线及结果47

2.4尿酸酶溶液的浓度测定实验结果48

2.5已纯化的尿酸酶SDS PAGE结果48

2.6 鸡尿酸含量测定试验结果49

2.7 ELISA实验结果52

3讨论53

第四部分 创新点与总结53

参考文献54

致谢58