论文摘要
葡萄（Vitis vinifera L.）是世界性重要水果，具有重要的食用价值和经济价值。干旱由于对葡萄的生长和产量造成的影响，被认为是最严重的自然灾害之一。因此，葡萄抗旱基因的鉴定对提高葡萄抗旱性以及培育抗旱新品种具有重要的意义。多蛋白桥梁因子MBF1（Multiprotein bridging factor1）在真核生物中是一个高度保守的转录辅激活因子，它主要是通过连接特异转录因子和TATA-box结合蛋白（TBP）来促进靶基因的转录。已有研究表明，植物MBF1参与植物的生长发育和多种胁迫反应，超表达MBF1可以提高植物对多种胁迫的抵抗力，如高温、干旱、病原菌侵染等，但对其具体的作用机制研究较少。本研究首次从葡萄中分离干旱胁迫响应基因VvMBF1，并通过在模式植物拟南芥中超表达VvMBF1基因研究其抗旱能力，从而探索VvMBF1基因可能的抗旱机制。获得主要结果如下：1.采用实时定量PCR技术分析VvMBF1在巨峰葡萄受干旱胁迫和ABA处理后叶片中的表达情况。结果表明，干旱胁迫后72h-168h，VvMBF1显著上调表达，上调表达最大值出现在胁迫处理后144h，复水后表达量下降，和对照无明显差异；ABA处理后，VvMBF1在6h出现表达最大值，表达量显著高于对照，其他时间点的表达量与对照无明显差异。2.采用RACE克隆获得VvMBF1基因5’和3’序列，其长度分别为510bp和650bp。DNAMAN分析结果表明，VvMBF1基因全长767bp，包含一个429bp的开放阅读框，编码142个氨基酸。氨基酸序列同源性及进化树分析表明：VvMBF1与AtMBF1a和AtMBF1b的同源性较高，与AtMBF1c的同源性较低，VvMBF1被归于与AtMBF1a和AtMBF1b同一组的植物组Ι。3.构建了VvMBF1基因过量表达载体pCAMBIA2300-35S-VvMBF1，并转化模式植物拟南芥。发现VvMBF1能提高转基因株系的抗旱性，进一步研究发现该抗性与脯氨酸含量的增加及活性氧、丙二醛含量降低有关；相同浓度ABA处理下，VvMBF1转基因株系叶片气孔比野生型植株对ABA敏感；VvMBF1转基因株系中依赖于ABA途径的抗旱基因AtRD22和AtRD29B的表达量显著高于野生对照。