论文摘要
木薯是重要的旱地经济作物及能源植物,广西是我国木薯的主产区,木薯“新选048"品种是广西主栽品种之一,具有抗旱、高产的特点,具有很好的经济价值。通过农杆菌介导,在优良木薯品种中转入抗逆性基因,获得既高产优质又具抗性的木薯新品种,是木薯育种的有效途径。本研究通过农杆菌介导,在木薯“新选048"中转入抗逆性基因,获得如下研究结果：1.以腋芽为外植体的再生体系建立灭菌：春秋季节取外植体,以0.1％HgCl2处理12min灭菌效果最好,污染率控制在30%以内,而成活率达到56.7%。初代诱导培养：添加KT的培养基外植体萌芽率比添加6-BA和TDZ的要高,最适培养基为MS+KT0.5mg/L,外植体腋芽萌发率可达85.0%,增殖培养：细胞分裂素与NAA配比的效果比单使用细胞分裂素或者与赤霉素配比的都好,以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基为最佳的增殖培养基,增殖率高,平均芽高度最高,可达5cm。生根培养：在合适的浓度下,单独添加NAA.IBA.IAA的培养基诱导的生根率都可达到100%,平均根数以MS+NAA0.6mg/L培养基的最多,达6.9条。移栽：控制空气湿度尤为重要,相对湿度太大,则容易引起组培苗植株茎段发霉腐烂,影响成活率。试验中,移栽18d后存活率不足10%,因此移栽技术还需进一步的研究。2、无菌叶片再生体系的建立选择无菌叶片诱导愈伤组织,最适诱导培养基为MS+2,4-D5.0mg/L,诱导率可达90%以上,愈伤组织淡黄色透明松软,在进一步培养中容易转化为胚性愈伤组织。愈伤组织的增殖培养基则以MS+2,4-D3.0mg/L为适宜,增殖率为90%。愈伤组织分化采用6-BA和NAA配合以及硫酸铜两种处理来诱导不定芽,结果6-BA和NAA配合处理并没有无菌芽的分化,而MS+CuSO4200mg/L处理有不定芽分化,但分化率不高。3、遗传转化体系的初步建立以无菌叶片和愈伤组织作为材料进行抗生素选择压的试验,以确定培养材料细胞全部死亡的最低抗生素浓度。试验结果为叶片抗生素选择压的培养基为MS+3.0mg/L2,4-D+2.3g/L Km,而愈伤组织抗生素选择压的培养基为MS+3.0mg/L2,4-D+2.5g/L Km.以携带目的基因的根癌农杆菌侵染无菌叶片,以5min为好,GUS瞬时表达率先升高后降低,最高为83.3%；对愈伤组织转化的效率以10min侵染时间相对较好,GUS瞬时表达率为85%。共培养时间2d对无菌叶片转化的效率最好,GUS瞬时表达率为77.8%。研究结果初步建立了农杆菌介导木薯“新选048"的遗传转化体系。