论文摘要
节瓜(Benincasa hispida Cogn. var. chieh-qua How)的遗传背景较为狭窄,这一特点制约了其利用传统育种方法进行新品种选育和性状改良工作的快速发展,使得现有抵抗病害以及适应自然逆境的品种较少,不能满足日益苛刻的种植需求。如何加快节瓜抗病品种选育的工作已经成为研究的重点,而植物转基因技术在育种上的应用为作物种质资源创新,选育抗性新品种提供了一个有效的基因操纵平台,探索适合节瓜的高效转基因途径成为重要的研究内容。本试验以节瓜优良自交系‘A39’为材料,OsOxO1基因为目的基因采用多种农杆菌介导的转化方法初步摸索了适合节瓜的高效遗传转化途径,主要结果如下：1、利用节瓜的半种作为外植体探索其离体再生体系条件并进行优化,进行农杆菌介导的遗传转化试验。研究确定了试验中筛选抗生素卡那霉素的最佳浓度,抑菌抗生素头孢霉素的抑菌浓度分别为45mg/L.400mg/L;农杆菌介导的半种法转化法一共获得9株卡那霉素抗性植株,通过PCR鉴定其中5株为阳性植株,转化率为0.125%。2、以节瓜优良自交系为材料,优化了原位转化体系。试验通过探究不同转化处理方法对节瓜转化受体生长发育的影响,建立了初步的转化操作体系。试验结果表明,划种法利用OD600为0.4的农杆菌浸泡节瓜种子转化效果以12h最佳,得到一株阳性植株,转化率为0.2%;生长点转化法同样利用OD600为0.4的农杆菌对幼苗顶端生长点进行不同方式的转化处理,其中注射法没有检测到转化植株,而浸染法检测到3株转化植株,转化率为0.69%。3、采用草酸氧化酶活性检测、草酸耐受性检测以及PCR和Southern blot检测对目的基因在节瓜基因组中的整合方式进行初步分析,PCR和Southern blot结果表明阳性植株中部分有特异性目的条带的存在,且一般是以低拷贝形式存在,仅划种法得到的转化植株为单拷贝形式存在,酶活性检测及耐受性检测表明转化植株体内检测到草酸氧化酶活性且拥有了一定的草酸耐受性,这些结果初步说明OxO基因已成功转化并整合到节瓜基因组中。