论文摘要
目的：本论文以附子-甘草药对为研究对象,考察其配伍前后汤液成分、相态理化性质、汤液毒效作用的变化,进而分析三者之间相关性,试图建立“汤液相态-化学成分-药理作用”整体机制分析模式,从“细微—宏观—效果”三个层面分析附子配伍甘草“增效解毒”作用,阐明中药配伍过程中汤液整体物质状态与作用机制,为研究中药汤液提供一条新的研究思路。方法与结果：第一部分：测定附子配伍甘草前后汤液中9种指标成分含量的变化,结果显示附子配伍甘草合煎后,汤液中6种乌头类生物碱和甘草中甘草酸与甘草次酸含量均降低,而甘草中甘草苷含量提高；建立同时测定附子配伍前后4种汤液化学成分的HPLC分析方法；建立附甘配伍前后4种汤液的指纹图谱共有模式；采用模型识别技术对4种汤液中化学成分进行分析,结果表明,附甘合煎液与附甘合并液成分有显著差异,体现于成分量与成分质的差异；通过偏最小二乘分析(PLS-DA)与聚类分析(HCA)筛选出12个对差异贡献较大的特征峰。第二部分：依据相律理论,借助界面化学手段,测定表征配伍前后4种汤液相态的理化参数,即电导率、盐度、黏度、浊度、表面张力、粒度。试验结果显示,附子甘草配伍共煎后,汤液的理化性质有明显改变。附甘合煎液汤液的电导率、盐度低于其他三种汤液(附子单煎液、甘草单煎液、附甘合并液),而合煎液中粒子粒径明显大于其他三种汤液。第三部分：采用全自动分析仪、试剂盒比对法测定灌服不同汤液后,大鼠体内与肝、肾、心功能相关的生化指标(BUN、CREA、CK、ALP、ALT、AST、 LDH、SOD、MDA)的变化,结果显示附子单煎液的毒性涉及大鼠肾、肝、心功能,其中对肾、肝脏有明显毒性；对心脏的影响较为复杂,附子损害大鼠心肌细胞,但具有改善心脏功能作用；甘草对肾、肝、心有一定程度保护作用,能缓解附子对肾、心的损害,且附子合煎液的毒性小于附子单煎液。采用BL-240生物机能系统,以心率、QRS延长率、心率失常潜伏期为指标,测定通过十二指肠注射不同汤液的大鼠的二导联心电图,结果显示附子单煎液、附甘合并液对大鼠心脏均有毒性。第四部分：考察显著影响配伍汤液化学成分差异的12个特征峰,通过灰色关联度分析法,分析化学组分与配伍前后汤液药效,化学组分与汤液相态的相关关系。关联度排序结果显示,12个特征峰中8个色谱峰与汤液相态、汤液毒效作用具有密切关系,通过对照品对照法鉴别出其中5个色谱峰为甘草苷、甘草酸、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱,另外3种成分,经HPLC分析提示可能为甘草中所含萜类成分与附子中所含生物碱类成分。结论：本论文从“细微—宏观—效果”三层面研究附子配伍甘草“解毒”作用,证实在中药配伍过程中,汤液”化学成分—汤液相态—毒效作用”具有相辅相成的关系,为研究中药汤液和中药配伍规律研究提供了新的研究思路。