论文摘要
第一部分孕期肥胖对胎鼠心脏结构和心肌细胞增殖的影响及其机制研究目的孕期肥胖通过影响AT1R和AT2R的表达来探讨胎鼠心脏结构和心肌细胞增殖改变的机制。方法在SD雌鼠妊娠期第1~21天给予高脂饮食,建立妊娠期肥胖动物模型。取21天乳鼠心脏进行原代心肌细胞培养，利用流式细胞技术检测心肌细胞的细胞周期。透射电镜观察21天胎鼠心脏超微结构的变化；Western-blot法检测心肌组织AT1R和AT2R蛋白表达的情况； RT-PCR法检测AT1R和AT2R mRNA的表达情况；染色质免疫沉淀方法和GR抗体提取GR-GRE复合物进行RT-PCR扩增检测GR与GRE结合力情况。结果1.与对照组相比，妊娠期第1天，肥胖组的孕鼠体重无显著性差异，但在妊娠期第21天，肥胖组的孕鼠体重显著增加（P<0.05）。2.肥胖组和对照组胎鼠的心脏重量与体重没有统计学差异，但肥胖组胎鼠心脏体重的比值明显高于对照组(P<0.05)。3.与对照组相比，肥胖组胎鼠心肌细胞在G1期细胞数量明显增加，而S期和G2期，心肌细胞数量显著减少（P<0.05）。4.孕期肥胖改变胎鼠心脏超微结构，包括肌原纤维排列紊乱，微丝模糊，变小，甚至消失；线粒体肿胀，线粒体嵴部分或全部消失，线粒体呈空泡化。5. Western-blot结果显示，与对照组相比，肥胖组胎鼠心脏AT1R蛋白表达水平明显降低，而AT2R蛋白水平显著升高（P<0.05）。6.RT-PCR结果显示，与对照组相比，肥胖组胎鼠心脏AT1aR mRNA水平明显降低；而AT2R mRNA水平显著升高（P<0.05）。7. Western-blot结果显示，与对照组相比，肥胖组胎鼠心脏GR总蛋白、GR核蛋白和GR mRNA水平显著降低（P<0.05）。8. ChIP结果显示在孕期肥胖减少AT1R和AT2R启动子上GRE与GR的结合。小结1.孕期肥胖导致胎鼠心脏超微结构（包括肌原纤维紊乱、线粒体肿胀、线粒体嵴消失甚至空泡化）的改变和心肌细胞增殖的抑制，这可能与血管紧张素Ⅱ受体的改变有关。2.孕期肥胖降低胎鼠心脏AT1aR和AT2R启动子上GR与GRE的结合，导致胎鼠心脏血管紧张素Ⅱ受体的改变。第二部分孕期肥胖对成年子代心功能异常程序化的影响及其机制研究目的孕期肥胖通过影响AT1R和AT2R的表达以及对子代大鼠心肌缺血再灌注损伤来探讨孕期肥胖导致成年子代鼠心脏功能异常的机制，并且确定是否存在性别差异。方法在SD雌鼠妊娠期第1~21天给予高脂饮食,建立妊娠期肥胖动物模型。出生后，肥胖组和对照组母鼠正常饮食，子代大鼠同等条件下饲养至3个月龄作为实验用动物。小动物超声成像系统检测成年子代大鼠心脏功能；子代大鼠心脏建立langendroff系统检测大鼠心脏缺血再灌注损伤的敏感性；TTC法测定子代大鼠缺血再灌注后心脏梗死面积；LDH试剂盒测定灌流液中LDH的活性；EIA法测定子代大鼠血清Ang II含量；Western blot法检测子代大鼠心肌组织AT1R和AT2R蛋白表达的情况；RT-PCR法检测AT1R和AT2R mRNA的表达；染色质免疫沉淀方法和GR抗体提取GR-GRE复合物进行RT-PCR扩增检测GR与GRE结合力情况。结果1.结果显示与对照组相比，肥胖组子代雄性大鼠的体重没有变化，而心脏重量和心脏体重比值显著升高（P<0.05），而雌性大鼠体重、心脏重量和心脏体重比值均没有改变。2.超声结果显示在短轴M模式下测量子代大鼠收缩功能，与对照组相比，肥胖组子代雄性大鼠的左心室舒张期前壁厚度（LVAW;d）、左心室收缩期前壁厚度（LVAW;s）、左心室舒张期后壁厚度（LVPW;d）、左心室收缩期后壁厚度（LVPW;s）、左心室射血分数EF（%）和左心室短轴缩短速率FS（%）均显著增加，而左室舒张末期内径（LVID;d）、左室收缩末期内径（LVID;s）明显减少（P<0.05）。而肥胖组子代雌性大鼠室壁厚度和心室内径均无显著差异。3.在二尖瓣灌流测量模式下测量子代大鼠舒张功能，肥胖组子代雄性大鼠和雌性大鼠的舒张功能均没有改变。测量的指标有MVA, MVE, E/A ratio, DT,IVRT, and ET。4.孕期肥胖加重子代雄性大鼠心脏缺血再灌注心功能的损伤、梗死面积和灌流液中LDH的活性（P<0.05）。而子代雌性大鼠心脏则没有改变。5.孕期肥胖增加子代雄性大鼠血清中AngII的含量（P<0.05），而雌性大鼠则没有变化。孕期肥胖增加子代雄性大鼠心脏AT2R蛋白和mRNA的表达（P<0.05），而雌性大鼠心脏则没有改变。然而，孕期肥胖对子代雄性和雌性大鼠心脏AT1R的表达没有任何影响。6.拮抗AT2R的表达可以逆转孕期肥胖增加子代雄性大鼠心肌缺血再灌注损伤敏感性。7.孕期肥胖降低子代雄性大鼠心脏AT2R启动子上GR与GRE的结合，这是由于雄性大鼠心脏GR核蛋白量的减少和结合力的降低导致的。小结1.孕期肥胖没有改变子代心脏收缩和舒张功能，但发现子代有心肌肥厚的倾向，并且存在性别差异。2.孕期肥胖通过下调GR的表达来增加AT2R基因的表达，从而增加子代缺血再灌注损伤的敏感性，并且存在性别差异。全文结论本研究采用妊娠期肥胖动物模型探讨了血管紧张素II受体在孕期肥胖对子代心功能影响中的作用。孕期肥胖改变胎鼠心脏结构和抑制心肌细胞增殖，其机制可能与AT2R/AT1R的比值改变有关；孕期肥胖通过下调子代心脏GR的表达来增加AT2R基因的表达，从而加重子代心肌缺血再灌注损伤，并且存在性别差异。