论文摘要
柔鱼是常见的大洋性头足类海洋生物，资源十分丰富。我国是捕捞和加工柔鱼的主要国家之一，在柔鱼的加工过程中，缠卵腺等加工副产物常被作为下脚料丢弃，未能获得充分利用，造成资源的浪费。本文以柔鱼缠卵腺为研究对象，在对其成分分析及糖蛋白不同提取方法进行探讨的基础上，确定了采用β-消除米氏加成反应法对柔鱼缠卵腺中的糖蛋白进行富集、提取，并优化分离提取方法及其技术工艺，获得缠卵腺糖蛋白；实验分析研究了糖蛋白的结构组成及其抗疲劳、抗氧化、免疫、降血脂等生物活性，获得了相关实验数据，为今后柔鱼缠卵腺的综合利用提供了参考依据。1)通过对柔鱼缠卵腺的成分分析，发现柔鱼缠卵腺中含有大量的糖类和蛋白质，且脂肪含量较少。从分析结果看，除了水分含量为77.8%外，粗蛋白和总糖的含量分别高达10.9%、8.5%，说明柔鱼缠卵腺中可能含有大量糖蛋白。实验分别采用水提法、酶提法和酸碱提法提取缠卵腺中的糖蛋白，结果发现，碱提法效果最佳，且具有提取量大、操作方便、乙醇用量少、糖蛋白收集方法简便等优点。经测定，采用碱提法，柔鱼缠卵腺中总糖和蛋白质的提取率之和可达到14.4%。2)为优化碱法提取柔鱼缠卵腺糖蛋白的工艺技术，以提取率、提取物中总糖和蛋白质含量为指标，进行NaOH浓度、NaBH4浓度、料液比、提取时间、提取温度和醇沉倍数等的单因素实验。在单因素的基础上，以提取率（Y）为指标，选取提取时间（A）、提取温度（B）和NaOH浓度（C）进行工艺条件的响应面法优化。实验结果，柔鱼缠卵腺糖蛋白的最佳提取工艺条件为：提取时间（A）为3.44h，提取温度（B）为25℃，NaOH浓度（C）为0.37mol/L，在此工艺条件下柔鱼缠卵腺糖蛋白的提取率为12.79%。3)通过对提取物中所含化学元素的X-射线能谱分析，发现该糖蛋白中除了含有大量的C、O元素外，S元素的含量也较高；通过红外光谱、紫外可见光光谱和核磁共振进行分析，结果表明提取物中有糖、蛋白和硫酸根的特征吸收，是一种硫酸化的糖蛋白。经成分测定，该糖蛋白中糖含量72.5%，蛋白质含量22.7%，硫酸根含量3.0%。单糖分析中未检测有糖醛酸，氨基糖GalNAc的含量与Ser/Thr的总含量接近，由此可推测该糖蛋白是以O-连接糖肽键为主的Mucin型糖蛋白。4)测定了柔鱼缠卵腺糖蛋白体外抗氧化和降血脂活性。通过测定该糖蛋白对羟基自由基（·OH）、超氧阴离子(·O2-)及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的清除能力评价其体外抗氧化活性；以聚乙烯醇橄榄油乳化液为底液，根据脂肪酸的生成量评价糖蛋白对胰脂肪酶的抑制作用。实验结果表明，柔鱼缠卵腺糖蛋白清除超氧阴离子和羟基自由基的效果较好，而清除DPPH的能力微弱；糖蛋白也能一定程度上抑制胰脂肪酶的活性，从而抑制脂肪的分解和吸收。5)建立实验动物模型测定了柔鱼缠卵腺糖蛋白的体内抗氧化、抗疲劳、降血脂和免疫生物活性。结果显示：柔鱼缠卵腺糖蛋白可以提高小鼠体内抗氧化酶系（总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶）的活力，具有抗氧化作用；可以延长小鼠负重游泳时间，对血糖调节能力和疲劳耐受能力的增强、血液中乳酸脱氢酶含量的增加以及血乳酸的减少有显著作用，具有抗疲劳作用；可以控制小鼠体重，调节血液中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的含量，具有降血脂的生物活性；还能一定程度上提高廓清指数和吞噬指数，说明该糖蛋白具有增强免疫力的可能性。