论文摘要
石栗(Aleurites moluccana)是大戟科(Euphorbiaceae)的木本油料植物,其种子油脂含量很高,是一种很重要的生物质能源植物。本试验克隆获得石栗ACCase中BCCP(生物素羧化酶载体蛋白,biotin carboxylase carrier protein)亚基以及BC (biotin carboxylase,生物素羧化酶)亚基的编码基因accB与accC的全长cDNA序列,对其进行生物信息学分析,并通过半定量RT-PCR分析这两个基因在石栗种子不同生长时期中的表达变化,为今后筛选分子标记或研究油脂合成相关酶基因提供参考。1.通过同源克隆法和RACE技术相结合,克隆得到了accB、accC这两个基因的全长cDNA序列,并推导出编码区氨基酸序列。通过NCBI网站及相关软件进行分析比对。结果显示,accB基因全长cDNA序列大小为1170bp,编码区长度为798bp,编码265个氨基酸。accB基因核苷酸序列与基因库中已注册的油桐、麻风树的核苷酸酸序列的同源性依次为：93%和82%,其氨基酸序列与陆地棉、油梨、大豆、苜蓿、麻风树、油桐的BCCP亚基的氨基酸序列同源性分别为：91%、83%、68%、64%、61%、52%；accC基因全长cDNA序列大小长度为1607bp,编码区长度为1119bp,编码372个氨基酸,accC基因核苷酸序列与油桐、麻风树和蓖麻的核苷酸酸序列的同源性分别为：97%、93%和91%,其氨基酸序列与麻风树、陆地棉、烟草、花生、大豆、拟南芥的BC亚基的氨基酸序列同源性分别为：96%、91%、89%、89%、88%、83%。2.采用反转录试剂盒将种子总RNA反转录后,获取了高质量的cDNA。以cDNA为模板,石栗管家基因Actin作为内参,通过半定量RT-PCR分析了石栗accB、accC这两个基因在石栗种子内不同发育时期的表达水平变化。在种子发育过程中accB基因与accC基因表达量大致情况是：六月份>七月份>五月份,同时油脂含量从五月份至七月份三个月间是持续上升的。得出结论：石栗种子油脂含量的升高与石栗accB、accC基因的表达变化有一定相关性。