论文摘要
目的：对比性研究逍遥散及其功能药队的抗抑郁药效和作用机制,为揭示逍遥散功效配伍与抗抑郁效应的相关性,阐释逍遥散“疏肝解郁”功效的科学内涵提供实验研究依据。方法：本研究从整体行为学、分子水平、数据系统性分析三个层面探讨和比较逍遥散及其功能药队(包括疏肝药：柴胡-薄荷；养血药：白芍-当归；健脾药：白术-茯苓-生姜-甘草)抗抑郁效应和作用机制。①采用应激抑郁小鼠模型(TST、FST),观察逍遥散及其功能药队对小鼠不动时间、自主活动量的影响。②采用CUMS大鼠模型,观察逍遥散及其功能药队对模型大鼠自主活动量(爬行距离和站立次数)、体重增长度、糖水偏爱百分比、T形迷宫觅食潜伏期的影响。③采用CUMS大鼠模型,观察逍遥散及其显效功能药队对模型大鼠自主活动量(爬行距离和站立次数)、体重增长度、糖水偏爱百分比、Morris水迷宫测试指标(逃避潜伏期、目标象限滞留时间百分比、目标象限运动距离百分比、目标象限进入次数百分比、逃逸平台进入次数、有效区域进入次数)的影响。④采用ELISA法测定CUMS模型大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量,血清CRH、Cort含量,血清、大脑皮质及海马中5-HT、BDNF含量,观察逍遥散及其显效功能药队对上述指标的影响。⑤采用ELISA法测定CUMS模型大鼠大脑皮质、海马部位IDOase、Cort含量；rt-qPCR法测定大脑皮质、海马部位GCR-mRNA、TrkB-mRNA相对表达量；Western Blot (WB)法测定大脑皮质、海马部位IL-1β相对含量,观察逍遥散及其显效功能药队对上述指标的影响。⑥应用SPSS17.0统计学软件对行为学、分子机制指标数据进行聚类分析和作用强度分析。结果：(1)逍遥散及其功能药队对应激抑郁模型小鼠行为学的影响逍遥散、疏肝药、养血药、逍遥散去养血药、逍遥散去疏肝药均能明显缩短TST、FST试验中小鼠的不动时间(P<0.01),且五组药物作用无显著性差异(P>0.05)。健脾药对小鼠不动时间无显著影响(P>0.05)。所有药物组在所试剂量下对小鼠自主活动无明显影响(P>0.05)。(2)逍遥散及其功能药队对CUMS模型大鼠行为学的影响连续给药4周(即造模6周)时,逍遥散、疏肝药、养血药均能显著增加模型大鼠爬行格数、站立次数、体重增长度、糖水偏爱百分比(P<0.05或P<0.01),并显著减少240s内觅食潜伏期(P<0.01或P<0.05)。健脾药组未出现相同的效应(P>0.05)。其中,逍遥散和疏肝药对模型大鼠上述行为学指标的改善作用优于养血药(P<0.05或P<0.01),逍遥散与疏肝药比较,作用无显著性差异(P>0.05)。(3)逍遥散及其显效功能药队对CUMS模型大鼠行为学的影响连续给药4周,逍遥散、疏肝药、养血药、逍遥散去养血药、逍遥散去疏肝药均能显著增加模型动物爬行格数、站立次数、糖水偏爱百分比、目标象限滞留时间百分比、目标象限运动距离百分比、目标象限进入次数百分比、逃逸平台进入次数和有效区域进入次数(P<0.01),并能显著缩短逃避潜伏期(P<0.01)。逍遥散、疏肝药、逍遥散去养血药尚能显著提高模型动物体重增长度(P<0.01)。对上述行为学指标的影响,疏肝药、逍遥散、逍遥散去养血药优于养血药、逍遥散去疏肝药(P<0.01),但疏肝药、逍遥散、逍遥散去养血药三者之间无显著性差异(P>0.05)。(4)逍遥散及其显效功能药队对CUMS模型大鼠细胞因子-内分泌(HPA轴)-5-HT/BDNF路径相关分子指标的影响逍遥散、疏肝药、养血药、逍遥散去养血药、逍遥散去疏肝药均能显著对抗CUMS程序所致血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平的升高(P<0.01)；逍遥散、疏肝药亦能显著降低模型大鼠大脑皮质和海马部位IL-1β含量(P<0.05)。其中,逍遥散、疏肝药、逍遥散去养血药对血清细胞因子水平的下调作用强于养血药、逍遥散去疏肝药(P<0.05或P<0.01),且三组药物效应无显著性差异(P>0.05)。逍遥散、养血药、逍遥散去疏肝药能显著对抗CUMS程序所致血清CRH、Cort的升高(P<0.01或P<0.05)；逍遥散、养血药亦能显著对抗CUMS程序所致大脑皮质和海马Cort升高(P<0.05),并上调模型大鼠大脑皮质和海马GCR-mRNA表达(P<0.05)。其中,逍遥散、养血药、逍遥散去疏肝药三者效应无显著性差异(P>0.05)。疏肝药、逍遥散去养血药未表现出调节上述指标的作用(P>0.05)。逍遥散、疏肝药、养血药、逍遥散去养血药、逍遥散去疏肝药能显著提高模型大鼠大脑皮质和海马部位5-HT含量(P<0.01或P<0.05)。其中,逍遥散对海马5-HT的改善作用最显著,优于疏肝药、逍遥散去养血药(P<0.01或P<0.05)。逍遥散、疏肝药、逍遥散去养血药三者对上述指标的作用强于养血药、逍遥散去疏肝药(P<0.05或P<0.01)。逍遥散、养血药、逍遥散去疏肝药能显著提高模型大鼠血清5-HT水平(P<0.01),逍遥散、疏肝药亦能显著降低模型大脑皮质和海马IDOase活性(P<0.05)。逍遥散、疏肝药、逍遥散去养血药能显著对抗CUMS程序所致血清、大脑皮质、海马BDNF的下降(P<0.01或P<0.05),三者效应无显著性差异(P>0.05)。养血药、逍遥散去疏肝药对模型大鼠血清、大脑皮质、海马BDNF均无显著改善作用(P>0.05)。逍遥散、疏肝药亦能显著提高模型大鼠大脑皮质和海马TrkB-mRNA表达(P<0.01或P<0.05)。(5)行为学、分子机制指标数据的聚类分析、作用强度分析以行为学指标或以抗抑郁分子机制指标为变量,通过聚类分析发现逍遥散组、疏肝药组、逍遥散去养血药组为一类；养血药组、逍遥散去疏肝药组为一类。并且在逍遥散组、疏肝药组、逍遥散去养血药组三者中,疏肝药组、逍遥散去养血药组归为一类,逍遥散组为一类。提示对行为学指标或抗抑郁分子机制指标的调节方面,逍遥散、疏肝药、逍遥散去养血药具有相同属性,逍遥散的作用与后两者则又有一定区别；养血药、逍遥散去疏肝药具有相同属性。通过不同显效功能药队相同指标之间的作用强度比较可知,逍遥散、疏肝药、逍遥散去养血药对行为学指标和分子机制指标的改善作用明显优于养血药、逍遥散去疏肝药。在行为学指标、血清细胞因子和大脑皮质5-HT水平上,逍遥散、疏肝药、逍遥散去养血药三者干预作用基本相似,但逍遥散提高海马5-HT水平的作用强于疏肝药和逍遥散去养血药。养血药与逍遥散去疏肝药对上述指标的作用强度基本相同。通过同一显效功能药队不同指标之间的作用强度比较可知,基于行为学研究,含有柴胡-薄荷的药物组合作用强度表现为：自主活动能力>记忆、认知能力>情绪情感调节；含有白芍-当归的药物组合作用强度表现为：记忆、自主活动能力>情绪情感调节>认知能力。基于分子机制研究,含有柴胡-薄荷的药物组合表现为：中枢5-HT水平>细胞因子水平；含有白芍-当归的药物组合则表现相反。通过指标效应趋势总结可知,代表疏肝治法的药物组合作用侧重点在细胞因子和中枢5-HT/BDNF/TrkB通路调节上,代表养血治法的药物组合侧重点在HPA轴功能(CRH、Cort/GCR)调控上。结论：逍遥散、疏肝药队、养血药队具有显著抗抑郁作用,作用机制与细胞因子/HPA/5-HT-BDNF三方面功能的协调调节有关,健脾药队的抗抑郁作用不明显。疏肝药队是参与逍遥散抗抑郁作用发挥的主要功能组合,在影响自主活动、体重及调节中枢5-HT/BDNF/TrkB通路和细胞因子方面表现出一定优势；养血药队则是辅助功能组合,在影响记忆能力、自主活动及调节HPA轴功能(CRH、Cort/GCR)方面表现出一定优势。二者的结合共奏全方的综合抗抑郁效应,提示疏肝、养血功能是逍遥散治疗抑郁症的基础。研究结果初步筛选出体现逍遥散全方抗抑郁效应的主要功能(治法),一定程度上阐释了逍遥散功能配伍特点与抗抑郁作用机制相关性的科学内涵,从传统中医药功能理论角度丰富了逍遥散抗抑郁药效机制研究内容,为其临床应用提供了更为全面的药理学依据。