论文摘要
目的群体感应系统（quorum sensing system，QSS）为铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa，PA）毒力因子表达的重要调控系统。PA群体感应（quorum sensing，QS）的引发与胞质内游离Ca2+浓度（cytosolic free Ca2+concentration，[Ca2+]i）的升高有关。钙拮抗剂苯磺酸氨氯地平（amlodipine besylate，AML）可拮抗胞外的Ca2+内流，调控PA的[Ca2+]i，从而抑制PA的QS。本研究探讨AML的QS抑制活性及其可能机制。方法1细菌培养采用平板划线法活化并分离单一菌落，制备斜面工作管。挑取单一菌落分别于LB、MH、PTSB液体培养基摇床有氧培养。2分组与给药设立正常对照组、0.5%二甲亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶剂对照组、钙离子载体A23187组（1μg·mL-1）及AML组（64、32、16μg·mL-1）。3测定指标及方法3.1平板菌落计数法测定PA菌液中的活菌数，并绘制PA对数期“活菌数-OD600”标准曲线，光电比浊法测定PA菌液中的活菌数（λ=600nm）3.2光电比浊法测定AML对PA增殖的影响并绘制生长曲线（λ=600nm）3.3微量肉汤稀释法测定药物对PA的最低抑菌浓度（minimun inhibitoryconcentration，MIC）3.4蛋白水解酶试验测定PA蛋白水解酶的表达3.5弹性蛋白酶试验测定PA弹性蛋白酶的表达3.6绿脓毒素试验测定PA绿脓毒素的表达3.7以Fura-2/AM为Ca2+荧光探针，荧光显微镜下观察探针在PA的负载情况，并用双波长荧光分光光度法测定PA的[Ca2+]i结果1PA对数期菌液的“活菌数-OD600”标准曲线为y=0.0797x+0.0094，R2=0.99752AML对PA的MIC为512μg·mL-13AML（256、128μg·mL-1）可抑制PA的生长（P<0.05）；AML（64、32、16μg·mL-1）对PA的生长无影响，选定AML（64、32、16μg·mL-1）作为实验浓度4AML（64、32、16μg·mL-1）可明显抑制PA绿脓毒素的表达（P<0.01）；可抑制蛋白水解酶和弹性蛋白酶的表达（P<0.05）5Fura-2/AM可成功负载于PA胞内，可用340nm/380nm荧光强度比值R（F340nm/F380nm）测定PA [Ca2+]i6AML（64、32、16μg·mL-1）可降低PA [Ca2+]i（P<0.05）结论1AML（64、32、16μg·mL-1）可抑制PA毒力因子的表达2AML抑制PA毒力表达的作用可能与干扰PA的钙信号转导系统调控PA的QS系统有关