论文摘要
本论文研究了从罗氏沼虾中分离的副溶血弧菌VIB461的群体感应(quorumsensing，QS)系统，并探究了群体感应抑制剂对副溶血弧菌群体感应系统及群体感应相关性状的调控作用。本论文的研究内容主要包括以下3个部分：1.副溶血弧菌群体感应信号分子的检测本文采用报告菌株根癌农杆菌A136和紫色杆菌CV026，结合反相C18薄层层析法检测了副溶血弧菌VIB461产生的酰基高丝氨酸内酯类信号分子(acyl-homoserine lactones，AHLs)。结果显示VIB461能产生C6-HSL和C8-HSL两种不同类型的AHLs信号分子，并且AHLs信号分子的活性随着培养时间延长呈现出先升高后降低的趋势，在对数生长末期时活性最强。同时我们还使用报告菌株哈维氏弧菌JMH597和JAF375检测了VIB461产生的AI-2型信号分子(autoinducer-2，AI-2)和霍乱弧菌I类信号分子(cholerae autoinducer-l，CAI-1)，结果显示VIB461能产生这两种类型的信号分子，其中AI-2信号分子活性在对数生长期迅速上升至较高的水平并保持至细菌生长的稳定期，而CAI-1信号分子仅在对数生长后期至稳定期前期表现出较强的活性。2.副溶血弧菌LuxS/AI-2型群体感应的研究本文采用PCR扩增了副溶血弧菌VIB461的luxS基因，通过克隆测序得到了长度为388bp的有效片段，经BLAST比对发现其序列与已上传的副溶血弧菌luxS基因的相似度高达98%，与其它菌luxS基因的相似度随亲缘关系变远而逐渐降低。同时我们使用荧光定量PCR检测了不同生长阶段和不同培养条件下VIB461luxS基因的表达情况，结果显示luxS表达量与AI-2活性基本一致，二者均受生长阶段和培养条件的调控。luxS基因在对数生长期开始大量表达，并保持较高的转录水平直至细菌生长稳定期。不同温度、pH和盐度对VIB461的luxS基因表达和AI-2活性均有影响。当温度、pH和盐度在一定程度上偏离最适生长条件时，luxS表达量和AI-2活性均有不同程度升高，但在高温条件下两者均有所降低。3.群体感应抑制剂对副溶血弧菌群体感应及相关性状的调控本文通过报告菌株哈维氏弧菌JMH597检测了群体感应抑制剂溴化呋喃酮抑制群体感应的效果及有效浓度范围，结果显示2mg/L及以上浓度的溴化呋喃酮均对JMH597的荧光有抑制作用，表明该溴化呋喃酮有较强的抑制群体感应的活性。溴化呋喃酮对副溶血弧菌VIB461的最小抑菌浓度为20mg/L。我们研究了亚抑菌浓度的溴化呋喃酮对VIB461LuxS/AI-2型群体感应及QS相关的生物膜和胞外酶的调控作用。结果显示，溴化呋喃酮对VIB461luxS基因表达和AI-2活性均有强烈的抑制作用，10mg/L溴化呋喃酮对二者的抑制率均达到80%以上。溴化呋喃酮能较为有效的抑制VIB461生物膜的形成，但对其明胶酶和卵磷脂酶活性均只有一定的抑制作用，推测这些性状除了受LuxS/AI-2型群体感应系统的调控外，可能还受其它因素的调控。