论文摘要
目的：考察感毒清颗粒体内、外抗流感病毒作用,并考察其对干扰素的诱生作用及Toll样受体信号通路的影响。方法：1.建立流感病毒A/四川/SWL/2009(H1N1)感染小鼠病毒性肺炎模型,考察感毒清颗粒对动物的死亡保护作用,并检测第3天和第6天的肺指数、肺病理形态学及肺组织病毒滴度的影响,评价感毒清颗粒体内的抗流感病毒效应。2.建立流感病毒(流感病毒A/四川/SWL/2009(H1N1),流感病毒A/福建同安/196/2009(H3N2),流感病毒B/重庆渝中/1384/2009,流感病毒B/四川安岳/139/2011)感染MDCK细胞模型,采用细胞病变法(CPE)测定TCID50,考察感毒清颗粒的体外抗病毒作用。3.建立流感病毒性肺炎模型,分别于第3天和第6天无菌取肺组织,采用ELISA法检测肺组织匀浆中IFN-α、IFN-β、IFN-γ的含量。采用Western Blot法测定Toll样受体信号通路关键靶点TLR3、TLR7、 TLR8、TLR9、TRAF6、IRF3、IRF7、IRF8、c-Jun, NF-κB蛋白表达。结果：1.感毒清颗粒可提高流感肺炎模型小鼠的存活率,延长存活时间,减轻或逆转由于病毒感染引起的体重下降,降低动物发病率和发病严重程度。同时可降低模型动物感染后第3和6天的肺指数、肺组织炎症和肺组织纤维化程度,延缓病程发展,并降低感染动物的肺病毒载量和病毒复制速率,且具有剂量相关性2.CPE测定流感病毒A/四川/SWL/2009(H1N1),流感病毒A/福建同安/196/2009(H3N2),流感病毒B/重庆渝中/1384/2009,流感病毒B/四川安岳/139/2011对MDCK的TCID50的log值分别为7.07,8.07,5.91,6.41,感毒清颗粒水溶液对MDCK细胞的TC0为530μg/ml。最高无毒浓度的感毒清颗粒水溶液对流感病毒A/四川/SWL/2009(H1N1)、流感病毒A/福建同安/196/2009(H3N2),流感病毒B/重庆渝中/1384/2009都无抑制活性,口服感毒清颗粒小鼠血清与对照小鼠血清无差异。3.病毒感染第3天和第6天,Toll样受体信号通路中TLR3、TLR7、TLR8受体含量显著高于空白组,有显著统计学意义(P<0.05),而TLR9、IRF8与空白组无差异,无统计学意义(P>0.05)。TRAF6、IRF3、IRF7、c-Jun和NF-κBp65受体蛋白表达量均显著高于空白组(P<0.05),说明病毒激活了Toll样受体信号通路。各给药组样本与安慰剂组相比,第3天样本的IFN-β含量都显著高于安慰剂组,感毒清颗粒中剂量组IFN-α含量高于安慰剂组,IFN-γ无统计意义。感毒清颗粒组第3天和第6天TLR3、TLR7、TLR8、TRAF6、IRF3、c-Jun和NF-κB p65受体蛋白表达量均显著低于模型对照组,有显著统计学意义(P<0.05),并呈—定的剂量依赖关系。结论：感毒清颗粒体内具有明显抗病毒效果；体外无明显抗病毒作用；抗病毒作用与早期诱生内源性IFN-α,诱生IFN-β有关及拮抗/抑制病毒激活的Toll样受体信号通路相关蛋白有关。